?2025年6月9日，為規(guī)范技術(shù)審評要求，進一步指導(dǎo)注冊申請人對申報資料的準備和撰寫，國家藥監(jiān)局組織制定了《軟組織再生型疝修補補片動物試驗研究技術(shù)審評要點（征求意見稿）》，并面向社會公開征求意見。
2025年6月9日，為規(guī)范技術(shù)審評要求，進一步指導(dǎo)注冊申請人對申報資料的準備和撰寫，國家藥監(jiān)局組織制定了《軟組織再生型疝修補補片動物試驗研究技術(shù)審評要點（征求意見稿）》，并面向社會公開征求意見。
軟組織再生型疝修補補片動物試驗技術(shù)審評要點（征求意見稿）
為了進一步規(guī)范軟組織再生型疝修補補片（以下簡稱為“再生型疝補片”）動物試驗，并指導(dǎo)該類產(chǎn)品注冊申請人進行動物試驗設(shè)計及注冊資料準備，制定本審評要點。
本審評要點系對再生型疝補片的一般要求，注冊申請人需依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化，并確定其中的具體內(nèi)容是否適用。
本審評要點是對注冊申請人和審評人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求且更為科學(xué)的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。需在遵循相關(guān)法規(guī)和標準的前提下使用本審評要點。
本審評要點是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本審評要點相關(guān)內(nèi)容也將進行適時的調(diào)整。
一、適用范圍
疝修補補片從修復(fù)機理考慮可劃分為兩種類型，第一種是不可吸收疝補片及瘢痕組織共同作用對缺損的軟組織進行修復(fù)，第二種是可吸收疝補片植入后形成重塑及再生的天然宿主組織對缺損的軟組織進行修復(fù)，本審評要點適用于后者。在該類產(chǎn)品進行臨床研究前，一方面需要開展動物試驗以保護臨床受試者的安全，另一方面考慮到臨床試驗中很難直接觀察到補片在人體內(nèi)的降解吸收及組織再生情況，所以必須開展相關(guān)動物試驗，對再生型疝補片對缺損軟組織的再生修復(fù)情況進行評價，以控制器械疝復(fù)發(fā)等相關(guān)并發(fā)癥的風險。
本審評要點主要是對再生型疝補片再生功效評價相關(guān)的動物試驗的基本要求。對于采用新材料、新設(shè)計的疝補片，注冊申請人宜根據(jù)產(chǎn)品特性及試驗?zāi)康拈_展更深入的動物試驗研究，如選擇多個種屬的實驗動物、結(jié)合材料降解特性設(shè)置隨訪時間、選擇相應(yīng)的統(tǒng)計學(xué)方法等。另外需注意，當注冊申請人考慮同時對產(chǎn)品可行性、安全性、其他有效性等進行綜合性評價時，例如對疝補片皺縮情況、移位情況、生物相容性等項目進行評價，動物試驗設(shè)計要素可能會與本審評要點存在差異。
二、動物試驗設(shè)計的考慮因素
（一）動物種類及模型建立
選擇適用的實驗動物進行疝補片再生功效情況的動物試驗研究。注冊申請人需對動物試驗中所采用動物的適用性進行分析，提供動物種類選擇及模型建立的確定依據(jù)，如參考文獻或前期探索性動物試驗資料等。
考慮到實驗動物與人體在腹壁解剖結(jié)構(gòu)、疝缺損程度等方面的可比性，建議選擇一定數(shù)量的某種成年大型動物（如豬等）進行動物試驗研究。對于由未在境內(nèi)外市售再生型疝補片中使用過的新材料制備的器械，建議先選擇某種成年小型動物（如大鼠等）進行可行性動物試驗研究。報告中詳細描述實驗動物的來源、背景、規(guī)格、微生物與寄生蟲控制級別等。
對于疝及腹壁缺損修復(fù)有效性的評價應(yīng)建立疝缺損動物模型。實驗動物常規(guī)麻醉后，褪去腹部毛發(fā)，切開皮膚及皮下組織，雙側(cè)乳頭線外側(cè)約3cm切開皮下組織，長度15cm，切除腹壁肌肉及筋膜全層，保留皮膚、皮下組織及腹膜。大型動物一般可得3cm×5cm缺損，小型動物可得1.5cm×1.5cm（或2cm×2cm）缺損。
缺損造模后直接用補片進行修補。補片覆蓋范圍至少超過缺損邊緣3cm。根據(jù)受試樣品預(yù)期臨床使用方法進行修補操作，補片放置于腹膜外，不關(guān)閉缺損，補片中央?yún)^(qū)域與缺損縫合一圈。必要時，制作內(nèi)引流，在腹膜上打孔。將補片以疝環(huán)缺損為中心完全覆蓋缺損，確保補片鋪平且完全貼合腹壁。間斷縫合固定補片，在低張力狀態(tài)下覆蓋腹壁缺損。縫合皮下筋膜和皮膚切口。
術(shù)后1周內(nèi)每日肌肉注射抗生素消炎，皮膚縫合處每日以碘伏消毒。
（二）對照的選擇
宜選擇材質(zhì)、結(jié)構(gòu)、生產(chǎn)工藝、適用范圍等方面最相似的境內(nèi)已上市軟組織再生型疝補片產(chǎn)品作為動物試驗的對照器械，詳細描述產(chǎn)品名稱、規(guī)格/型號、批號、數(shù)量、臨床適應(yīng)證。在開展新生組織的機械性能研究時可與自然腹壁進行比較?？紤]隨機化的設(shè)計并予以描述。
一般采用單只動物分別植入申報產(chǎn)品或?qū)φ债a(chǎn)品的設(shè)計。若動物試驗僅評價疝補片與組織的局部作用及反應(yīng)，且動物大小允許，可在腹壁兩側(cè)缺損位置分別植入實驗組及對照組補片。
（三）評價指標的選擇
1．一般項目觀察評價
于術(shù)前、術(shù)后7天內(nèi)每天測量并記錄動物體溫，確認有無異常。如有異常，應(yīng)持續(xù)觀察至體溫恢復(fù)正常。觀察所有動物的活動與進食情況。每周記錄體重變化。
于術(shù)后7天每天觀察術(shù)后切口愈合情況，按照確定切口愈合等級并記錄，參照YY/T 1754.3-2023判定切口清潔程度和愈合等級，見表1，由未參與實驗的專業(yè)人員評判分級并記錄。如有異常，應(yīng)持續(xù)觀察記錄。
表1 切口清潔程度和愈合等級
級別 | 清潔程度 | 愈合等級 |
一類 | 清潔，無菌切口 | 甲級愈合，切口拆線后一次性愈合，沒有感染 |
二類 | 相對清潔，可能會污染的切口 | 乙級愈合，切口有感染，或拆線后切口裂開，經(jīng)換藥或清創(chuàng)縫合后愈合 |
三類 | 被污染或有感染的切口 | 丙級愈合，切口裂開或感染，沒有愈合 |
于術(shù)前、術(shù)后2周、處死時取血并收集血樣，檢測血常規(guī)（紅細胞計數(shù)，白細胞計數(shù)，血紅蛋白，中性粒細胞計數(shù)，淋巴細胞計數(shù)，血小板計數(shù)）、凝血（ACT、纖維蛋白原）、血生化（總蛋白、白蛋白、球蛋白、ALT、AST、GGT、膽紅素、肌酐、尿素氮）。如有異常，進一步分析原因。
2. 疝復(fù)發(fā)及修復(fù)效果評價
（1）疝復(fù)發(fā)情況
術(shù)后4周，直視觀察確認修復(fù)區(qū)有無疝復(fù)發(fā)（以觀察到明顯疝環(huán)或腹部體表明顯凸起、凸起高度超過1cm確認發(fā)生疝復(fù)發(fā)）。若發(fā)現(xiàn)疝復(fù)發(fā)，應(yīng)確認疝復(fù)發(fā)因素為手術(shù)因素（補片固定脫離）或補片因素（補片降解后無再生組織），并進行記錄。
（2）修復(fù)效果觀察
處死動物，進行下列指標的檢查：
補片修復(fù)部位感染、補片降解情況。
補片狀態(tài)：觀察并記錄血清腫/血腫、補片位移、固定脫落、折疊等。
沿腹膜完整取下各組補片的修復(fù)區(qū)及周圍1cm組織。測量重塑及再生組織面積和厚度：修復(fù)區(qū)域內(nèi)選擇10個點測量其厚度，記錄數(shù)值并計算平均值，并與對照樣品組進行統(tǒng)計學(xué)分析。選擇的測試點應(yīng)能代表整個修復(fù)區(qū)的修復(fù)情況。
3. 組織病理學(xué)評價指標
組織病理學(xué)可觀察補片植入后的炎癥反應(yīng)、新生膠原排列形態(tài)、補片降解吸收等情況，對評價組織重塑及再生非常重要。
收集完整的修復(fù)區(qū)以及至少5 mm相鄰組織，取材深度包括整個植入?yún)^(qū)組織連同其覆蓋的腹膜，沿組織中線、動物身長方向切開將組織分為兩部分，一部分用于生物力學(xué)性能評價，另一部分用于組織病理學(xué)評價，將取材標本沿同一對角線方向切開后取連續(xù)組織塊依次分別切片后做病理檢查，將用于組織病理評估的組織完整地放入10％中性福爾馬林中。待組織完全固定，常規(guī)方法制作石蠟切片，分別進行組織學(xué)染色。
通過HE染色可以觀察修復(fù)區(qū)炎性細胞浸潤、組織反應(yīng)、補片降解、鈣化情況。通過Masson和天狼星紅染色顯示膠原纖維及其分型，從而對修復(fù)區(qū)的組織結(jié)構(gòu)和功能評價提供支持。
按表2和表3記錄重塑及再生組織區(qū)炎癥細胞類型/反應(yīng)和組織反應(yīng)。按表4和表5進行反應(yīng)類型的半定量記分。
表2 修復(fù)組織區(qū)炎癥細胞類型/反應(yīng)
細胞類型/反應(yīng) | 記分 |
0 | 1 | 2 | 3 | 4 |
多形核白細胞 | 0 | 極少，1～5/phfa | 6～10/phf | 重度浸潤 | 滿視野 |
淋巴細胞 | 0 |
漿細胞 | 0 |
巨噬細胞 | 0 |
巨細胞 | 0 | 極少，1～2/phf | 3～5/phf | 重度浸潤 | 成片分布 |
壞死 | 0 | 極少 | 輕微 | 中度 | 重度 |
a phf= 每高倍（400×）視野。 |
表3 修復(fù)組織區(qū)組織反應(yīng)
反應(yīng) | 記分 |
0 | 1 | 2 | 3 | 4 |
新血管形成 | 0 | 輕微毛細血管增生，局灶性，1～3個芽 | 4～7組毛細血管增生，輔以成纖維細胞結(jié)構(gòu) | 較大范圍的毛細血管增生，輔以成纖維細胞結(jié)構(gòu) | 廣泛毛細血管增生，輔以成纖維細胞結(jié)構(gòu) |
纖維化 | 0 | 局限性區(qū)域 | 中度厚區(qū)域 | 厚區(qū)域 | 廣泛區(qū)域 |
脂肪浸潤 | 0 | 極少量脂肪細胞，伴纖維化 | 數(shù)層脂肪細胞和纖維化 | 植入部位脂肪細胞聚集區(qū)域延伸擴大 | 植入物周圍完全被脂肪細胞包繞 |
細胞浸潤 | 0 | 細胞與支架外表接觸，未浸入支架內(nèi)部 | 細胞浸入支架，但未到中央?yún)^(qū)域 | 細胞浸入到支架中央?yún)^(qū)域 | 完全浸入 |
ECM沉積 | 0 | 宿主ECM沉積在支架外表 | 宿主ECM沉積到支架內(nèi)部，但未到中央?yún)^(qū)域 | 宿主ECM沉積到支架內(nèi)部，包括中央?yún)^(qū)域 | 完全沉積 |
補片支架降解 | 0 | 支架部分降解，被細胞、血管、宿主組織等分層 | 支架大部分降解，結(jié)構(gòu)崩解 | 支架嚴重降解，難以與宿主組織區(qū)分 | 支架完全降解 |
表4 組織學(xué)半定量評價系統(tǒng)
組別 類型 | 試驗樣品組 | 對照樣品組 |
多形核白細胞 |
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淋巴細胞 |
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漿細胞 |
|
|
巨噬細胞 |
|
|
巨細胞 |
|
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壞死 |
|
|
試驗樣品與對照樣品判定標準為：
——無刺激或極輕微刺激（0.0～2.9）；
——輕微刺激（3.0～8.9）；
——中度刺激（9.0～15.0）；
——重度刺激（≥15.1）。
表5 組織重塑再生評價示例
組別 類型 | 試驗樣品組 | 對照樣品組 |
細胞浸潤 |
|
|
組織長入 |
|
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脂肪浸潤 |
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纖維化 |
|
|
補片支架降解 |
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|
新血管形成 |
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ECM沉積 |
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4. 生物力學(xué)性能
生物力學(xué)性能對于評價疝補片的再生修復(fù)療效十分重要。在再生型疝補片植入后，材料與新生組織的結(jié)合體共同發(fā)揮對缺損組織進行修復(fù)的作用，需要在不同的時間點完整取下修復(fù)區(qū)域疝補片材料與再生組織結(jié)合體，進行如拉伸強度或頂破強度等生物力學(xué)性能的測試。
注冊申請人需繪制軟組織再生型疝補片生物力學(xué)性能與植入時間相關(guān)的擬合曲線，對比該曲線最低值與該生物力學(xué)性能臨床可接受標準的大小，評價補片降解與組織再生速率的匹配性。理想的軟組織再生型疝補片應(yīng)在植入后直至完全降解、再生修復(fù)完成的整個過程中均保持足夠的生物力學(xué)性能。
（1）頂破強度：盡可能大地取出樣品，取出的組織試樣離體后，保持組織濕潤并立即檢測，如樣品太干，復(fù)水后檢測。測試方法見YY/T 0500-2021中探頭破裂強度法，對結(jié)果進行分析。
（2）拉伸強度：取出的組織試樣離體后，保持組織濕潤并立即檢測，如樣品太干，復(fù)水后檢測。若豬作為實驗動物，分別裁剪寬度不小于10mm，長度不小于50 mm組織試樣各3塊（若不能滿足上述尺寸，盡可能裁剪出規(guī)則形狀的條狀樣品），記錄組織試樣厚度、寬度。將試樣兩端固定于萬能拉力試驗機夾具，兩夾具間距約20 mm，按照100 mm/min的速度穩(wěn)定拉伸，直至組織試樣斷裂，記錄單位寬度的最大拉伸力與位移，對結(jié)果進行分析。
注：樣品制備過程中，若補片各向異性，未完全降解且易于觀察的情況下，盡可能按照樣品的不同方向取樣。
如樣品數(shù)量限制無法完成兩項生物力學(xué)試驗，優(yōu)先測量樣品的頂破強度。
5. 免疫生化分析：
免疫生化檢測對再生型疝補片的再生修復(fù)功效評價也有一定的參考價值。根據(jù)檢測目的可大致分為炎癥反應(yīng)因子（如TNF-A、TGF-β1）、血管生成相關(guān)因子（如VEGF、CD31）、肌細胞生成相關(guān)因子（如肌球蛋白、肌細胞生成素）、巨噬細胞分型（M1及M2）、膠原蛋白（Ⅰ型、Ⅲ型）、細胞外基質(zhì)沉積。免疫生化檢測應(yīng)該與組織病理學(xué)結(jié)果聯(lián)合進行分析，目前尚未形成統(tǒng)一的評分標準，可根據(jù)動物試驗?zāi)康膩磉x擇合適的指標進行檢測。
6．不良反應(yīng)
對安全性事件或異常進行記錄和分析，如發(fā)生感染、漿液腫（積液、血清腫）、臟器侵蝕、出血、死亡等，應(yīng)詳細分析死亡原因，分析與受試樣品的相關(guān)性。
（四）觀察時間點的選擇
一般情況下，需結(jié)合再生型疝補片的降解特性、動物種類、評價指標等因素綜合確定術(shù)后解剖及觀察時間點。應(yīng)采用連續(xù)觀察的方式，對于大鼠等小型動物，一般觀察到產(chǎn)品預(yù)期完全降解的時間，如3個月內(nèi)降解，可以在第1、2、4、8、12周處死；對于豬等大動物，一般也應(yīng)觀察到產(chǎn)品預(yù)期完全降解的時間，如5個月內(nèi)降解，在術(shù)后4、12、24周等適宜的時間點處死，根據(jù)植入材料的數(shù)量及研究設(shè)計取材。
（五）實驗樣本量及結(jié)果分析
1．樣本量
一般情況下，動物試驗樣本量需結(jié)合再生型疝補片的降解特性、試驗設(shè)計類型、評價指標、評價方法的準確性、試驗器械及對照器械的情況、實驗用動物的變異性、外科手術(shù)操作的一致性、試驗中動物的預(yù)期損耗率、分析數(shù)據(jù)所用的統(tǒng)計學(xué)方法等因素來綜合確定，并需有統(tǒng)計學(xué)考慮?？蓪F(xiàn)有的試驗數(shù)據(jù)作為確定樣本量的參考，包括文獻報道的動物試驗或申報產(chǎn)品的預(yù)試驗情況。注冊申請人應(yīng)在注冊資料中提交動物試驗樣本量的確定依據(jù)。
2．結(jié)果分析
定量指標的統(tǒng)計描述將計算均值、標準差、中位數(shù)、最小值、最大值，下四分位數(shù)（Q1），上四分位數(shù)（Q3）；分類指標的統(tǒng)計描述各類的例數(shù)、發(fā)生率及構(gòu)成比。
動物試驗若采用單只動物分別植入申報產(chǎn)品或?qū)φ债a(chǎn)品的設(shè)計，對兩組一般情況的比較將根據(jù)指標的類型采用適當?shù)姆椒ㄟM行分析，定量資料的組間比較采用成組t檢驗或Wilcoxon秩和檢驗，分類數(shù)據(jù)采用卡方檢驗或精確概率法；等級資料采用Wilcoxon秩和檢驗。
動物試驗結(jié)論需包括統(tǒng)計學(xué)分析與生物學(xué)數(shù)據(jù)分析的綜合評價結(jié)果。
三、其他應(yīng)注意的問題
為保證動物試驗結(jié)果真實、可靠，應(yīng)使用質(zhì)量合格的實驗動物或檢疫合格的實驗用動物。建議在具備動物試驗資質(zhì)（如：有關(guān)部門頒發(fā)的動物試驗資格證明文件）的機構(gòu)開展動物試驗。注冊申請人需與動物試驗實施單位簽訂合同并共同設(shè)計、制訂動物試驗方案，上述資料作為產(chǎn)品質(zhì)量體系管理文件存檔。注冊時提交注冊申請人與動物試驗實施單位共同確認并簽章的動物試驗報告，另外建議提供動物試驗實施單位的資質(zhì)文件。
為保證動物試驗的研究質(zhì)量，應(yīng)盡量避免不同術(shù)者手術(shù)操作差異、動物麻醉死亡、手術(shù)死亡、術(shù)后感染及其他意外情況對產(chǎn)品評價產(chǎn)生影響。建議注冊申請人邀請有經(jīng)驗的經(jīng)過培訓(xùn)的專業(yè)人員進行評價。注冊申請人需保存詳細的試驗情況記錄及分析資料，包括以下適用的內(nèi)容：所有受試品及對照品信息、動物飼養(yǎng)記錄、鎮(zhèn)痛麻醉記錄、手術(shù)過程記錄、原始病理照片、手術(shù)切片、手術(shù)錄像等實驗原始資料、對動物麻醉死亡等非預(yù)期事件的有關(guān)證據(jù)及分析資料等。為了保證數(shù)據(jù)的溯源性，上述資料需作為產(chǎn)品質(zhì)量管理體系文件存檔。
四、參考文獻：
[1]醫(yī)療器械動物試驗研究注冊審查指導(dǎo)原則 第一部分：決策原則:國家藥品監(jiān)督管理局2021年第75號[Z].
[2]醫(yī)療器械動物試驗研究注冊審查指導(dǎo)原則 第二部分：試驗設(shè)計、實施質(zhì)量保證:國家藥品監(jiān)督管理局2021年第75號[Z].
[3]GB/T 16886, 醫(yī)療器械生物學(xué)評價系列標準[S].
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[6]YY/T1754.3-2023, 醫(yī)療器械臨床前動物研究 第3部分：用于評價補片組織學(xué)反應(yīng)與生物力學(xué)性能的動物腹壁切口疝模型[S].